CEInfinite Imagem de coluna completa com foco isoelétrico iCIEF

CEInfinite Imagem de coluna completa com foco isoelétrico iCIEF

CEInfinte espectroscopia de massa em linha direta imagem de coluna completa com foco isoelétrico iCIEF

CEInfinite iCIEF-MS Plataforma de Coulping Online

No desenvolvimento e produção de bioprodutos proteicos, devido à modificação pós-tradução(PTMs) e degradação, gerando uma carga elétrica para a proteína alvoheterogêneoO corpo. BiofarmacêuticaempresaFoco elétrico com base nos capilares(CIEF) e imagem CIEF (iCIEF) para quantificar isômeros de carga elétrica. A caracterização de isômeros de carga biológica é útil em muitas fases do ciclo de vida, incluindo seleção de linhas celulares, estudos de estabilidade, formulação eprocessocontrole, mas essa caracterização requer a separação da proteína em uma única carga elétrica com pureza suficienteDestilação de isômerospara análise downstream.

Além disso, o acoplamento direto do iCIEF com o espectrómetro de massa (MS) usado para a caracterização simplificará significativamente o processo de caracterização.

A AES desenvolveu o sistema iCIEF preparado para o CEInfinite e a coluna de separação de detecção de imagem de coluna completa (WCID) patenteada para a separação de iCIEF-WCID e acoplamento on-line com MS, permitindo a observação em tempo real da dinâmica do foco de separação (iCIEF) e do processo de migração de picos de isômeros de carga subsequentemente separados. Durante a migração de pressão, o campo elétrico mantém a amostra no capilar separado focada. O diâmetro interno dos capilares de separação é maior, enquanto o diâmetro interno dos capilares de transmissão é menor. Assim, essa diferença de diâmetro interno reduz significativamente a difusão e a remixturação dos isômeros de proteína isolados ao sair da coluna.

Detalhes

Destaques do CEInfinite iCIEF-MS

• Combine o iCIEF-MS diretamente com o ESI de fluxo nanométrico tradicional de baixo fluxo ou de alta sensibilidade da Thermo Fisher Scientific, Waters e Bruker.

• Qualquer tampão ou solução pode ser usada como líquido suplementar. Não envolve a migração química. Variantes de carga de proteína são introduzidas em MS de acordo com o pI.
  

• O CE-MS pode ser convertido diretamente de qualquer método iCIEF ou CIEF existente. Boa separação é possível em baixas e altas concentrações de amostra.

Análise iCIEF-MS de amostras de mAb do NIST

O iCIEF-UV (vermelho) e o iCIEF-MS (azul) permitem uma visão clara do perfil dos isômeros de carga e obtêm excelentes espectrogramas MS de todos os picos de variação, o que nos permite desenvolver a maioria das variações de carga mAb completas do NIST.

Os resultados sugerem que os picos alcalinos B1 e B2 são causados principalmente pela isomerização da lisina C-terminal, com picos ácidos A1 com menor diferença de peso molecular do pico principal, provavelmente devido a modificações como a desamida, que necessitam de mais estudos e confirmação através do iCIEF preparatório.

Avaliações dos clientes:

“O iCIEF desempenha um papel fundamental no monitoramento das mudanças de carga durante o desenvolvimento biofarmacêutico. O CEInfinite nos permite obter leituras de massa das variantes de produto detectadas pelo iCIEF, o que é de grande ajuda para a compreensão das propriedades químicas das variantes de carga. Quando o CEInfinite é usado em combinação com a espectroscopia de massa de alta resolução fornecida pelo sistema Orbitrap MS, é possível obter uma visão detalhada das variantes do produto e da estabilidade do produto.

Em suma, o iCIEF-MS com o CEInfinite é uma ferramenta de caracterização muito poderosa no desenvolvimento biofarmacêutico. "

Dr. Dan Bach Kristensen

Cientista-chefe da Symphogen